Skip to content

Białko X wirusa zapalenia wątroby B promuje inwazję komórek nowotworowych poprzez indukowanie ekspresji metaloproteinazy-1 w postaci błonowej i ekspresji cyklooksygenazy-2 czesc 4

1 tydzień ago

759 words

Zmienną ilość proMMP-2, która okazała się nieistotna, można było zaobserwować w supernatantach hodowli komórkowej. MMP-9 nie wykryto ani w ekstraktach komórkowych, ani w supernatantach z hodowli komórkowych (Figura 2, c i d). Warto zauważyć, że gdy supernatanty były stężone ponad pięciokrotnie, można było zaobserwować niewielką ilość proMMP-9, a ta ilość nie różniła się między komórkami CMX i CMO (nasze niepublikowane dane). Zwiększenie aktywowanej MMP-2 w ekstraktach komórkowych eksprymujących HBx jest zależne od regulacji w górę MT1-MMP. Aby ustalić, czy aktywacja MMP-2 koreluje z indukcją ekspresji MT1-MMP, przeprowadziliśmy badania metodą Western blot. Komórki CMX wykazały zwiększoną ekspresję MT1-MMP w porównaniu z komórkami CMO (Figura 3a), korelując z indukcją aktywowanego MMP-2. Konsekwentnie, komórki 2.2.15 również wykazywały wzrost ekspresji MT1-MMP w porównaniu z komórkami HepG2 (Figura 3a). Aby zbadać udział MT1-MMP w indukowaniu inwazji komórek przez HBx, przetestowaliśmy wpływ blokującego mAb anty-MT1-MMP LEM 1/58 (22) na zdolność inwazyjną różnych linii komórkowych. Blokada miejsca katalitycznego MT1-MMP spowodowała utratę zdolności inwazyjnej przez komórki CMX i 2.2.15 (Figura 3b). Dodatkowo, zahamowanie aktywności MT1-MMP spowodowało zmniejszenie aktywowanej MMP-2 w komórkach CMX (Figura 3c), jak oznaczono metodą Western blot, co sugeruje, że MT1-MMP odgrywa ważną rolę w indukcji inwazji komórek nowotworowych i MMP -2 aktywacja przez HBx. Odpowiednio, obserwowano regulację w górę mRNA MT1-MMP przez ilościowy RT-PCR zarówno w komórkach CMX, jak i w komórkach wątroby Chang przejściowo transfekowanych wektorem ekspresyjnym HBx (Figura 3d). Figura 3 Wzrost aktywności aktywowanej MMP-2 i inwazji komórek za pośrednictwem HBs jest spowodowany indukcją ekspresji MT1-MMP. (a) Ekspresję MT1-MMP analizowano metodą Western blot w komórkach CMO, CMX, HepG2 i 2.2.15 hodowanych przez 24 godziny pod nieobecność surowicy. (b) Komórki CMO, CMX, HepG2 lub 2.2.15 mogły zaatakować transwell opłaszczony Matrigelem w obecności mAb anty-MT1-MMP LEM 1/58 lub przeciwciała kontrolnego. Inwazję oznaczono ilościowo, jak na Figurze 1. (c) Komórki CMO i CMX inkubowano przez 24 godziny w obecności mAb blokującego anty-MT1-MMP LEM 1/58 lub mAb kontrolnego i obecność MMP-2 w surowicy. lizaty komórkowe analizowano metodą Western blot. (d) Obecność mRNA MT1-MMP badano za pomocą ilościowego RT-PCR w komórkach CMO i CMX oraz w komórkach wątroby Chang (CHL) przejściowo transfekowanych wektorem do ekspresji HBx lub plazmidem kontrolnym. Indukowana HBx ekspresja MT1-MMP i inwazja komórek nowotworowych są wrażliwe na inhibitory COX-2. Następnie badaliśmy wpływ różnych inhibitorów COX-2 na inwazję komórek indukowaną HBx. Specyficzny dla COX-2a inhibitor NS398 blokował indukcję aktywacji MMP-2 przez HBx w sposób zależny od dawki, i to hamowanie można odwrócić przez dodanie prostaglandyny E2 (PGE2) (Figura 4a). Ponadto traktowanie komórek CMX i 2.2.15 za pomocą 100 .M NS398 powodowało zmniejszenie ekspresji MT1-MMP, podczas gdy nie miało ono wpływu na komórki CMO lub HepG2 (Figura 4b). Analiza ekspresji mRNA MT1-MMP za pomocą ilościowego RT-PCR w komórkach CMX i CMO traktowanych 100. M NS398 wykazała wyraźne hamowanie syntezy mRNA MT1-MMP przez komórki CMX (Figura 4c), potwierdzając rolę dla COX-2 w indukcja ekspresji MT1-MMP przez HBx. Przeciwnie, obserwowano niewielkie lub żadne zmniejszenie mRNA MMP-2 w komórkach CMX lub CMO (nie pokazano). Co ciekawsze, zdolność inwazyjna CMX, ale nie CMO, uległa dramatycznemu zmniejszeniu w obecności NS398 (Figura 4d). Dodanie PGE2 przywróciło około 75% komórek CMX. zdolność inwazyjna, wzmacniając dowód zaangażowania COX. Ponadto, zdolność inwazyjna wykazana przez komórki 2.2.15 została zmniejszona o NS398 do poziomów prezentowanych przez komórki HepG2 (Figura 4d). Figura 4 Indukcja aktywacji MMP-2, ekspresja MT1-MMP i inwazja komórek przez HBx jest wrażliwa na inhibitor NS398 COX-2. (a) Przez 24 godziny komórki CMX hodowano w obecności rosnących ilości, a komórki HepG2 i 2.2.15 hodowano w obecności 100 | jM inhibitora NS398 specyficznego dla COX-2a, razem z 10 (xM. PGE2 gdzie wskazano. Obecność aktywowanej MMP-2 w lizatach komórkowych analizowano metodą Western blot. (b) Komórki CMO, CMX, HepG2 i 2.2.15, jak również komórki 4pX, w których indukowano ekspresję HBx przez usunięcie tetracykliny (Tet) przez 24 godziny, traktowano lub nie traktowano 100 .M NS398 przez 24 godziny i poddano lizie, a ilość białka MT1-MMP badano metodą Western blot. (c) Komórki CMX i CMO traktowano lub nie traktowano 100 .M NS398 przez 24 godziny, a ekspresję transkryptów MT1-MMP analizowano za pomocą ilościowego RT-PCR.
[patrz też: azotyny w moczu przyczyny, ciasteczka z wróżbą teksty, kiedy szczepić na pneumokoki ]
[przypisy: sanatorium goczałkowice zdrój, mleko kokosowe właściwości, wkładki higieniczne dla mężczyzn ]