Skip to content

Delecja fosfodiesterazy 4D u myszy skraca znieczulenie a-adrenoceptorowe, behawioralny korelator wymiotów cd

3 miesiące ago

510 words

Po odwirowaniu przy 16,000 g przez 20 minut, supernatant poddano immunoprecypitacji za pomocą swoistego wobec PDE4D mAb, M3S1 lub swoistego dla PDE4B przeciwciała poliklonalnego, K118. Immunoprecypitowane białka PDE4D i PDE4B wykryto dalej za pomocą analizy Western blot przy użyciu swoistego dla PDE4D mAb, 61D10E (dar od ICOS Corp., Bothell, Washington, USA) lub specyficznego dla PDE4B przeciwciała poliklonalnego, K118, odpowiednio. Procedury immunoprecypitacji i Western blot przeprowadzono jak opisano wcześniej (23). Prezentacja danych i ocena statystyczna. Czas trwania znieczulenia, po danym leczeniu, wyrażany jest w czasie (minuty). Porównania między myszami traktowanymi nośnikiem i testowanym związkiem a przeprowadzono w oddzielnych zwierzętach i każde zwierzę użyto do wytworzenia tylko jednego punktu danych przy dowolnym danym stężeniu leczenia lekiem. Wszystkie dane w tekście i rycinach są wyrażone jako średnia. SEM, i n oznacza liczbę zwierząt badanych dla każdego stężenia testowanego związku (n = 5, o ile nie wskazano inaczej). Statystycznie istotne różnice między grupami określono przy użyciu analizy wariancji z wielokrotnymi porównaniami (test Bonferroniego). Różnice uznano za statystycznie istotne dla wartości P mniejszych niż 0,05. Leki. Inhibitory PDE4 (R) -rolipram, (S) -rolipram (15) i 6- (4-pirydylometylo >) – 8- (3 -nitrofenylo) chinolina (PMNPQ) (24) zsyntetyzowano w Merck Research Laboratories ( Montreal, Quebec, Kanada). (R) -N- {4- [1- (3-cyklopentyloksy-4-metoksyfenylo) -2- (4-Bpirydylo) etylo] fenylo} N3-etylomocznik (CT-2450) ( 25) zsyntetyzowano w Celltech Pharmaceuticals Ltd. (Slough, Wielka Brytania), a ich moc przeciw podtypom PDE4 przedstawiono w Tabeli 1. Charakterystyka biochemiczna PMNPQ była wcześniej opublikowana pod niepoprawną nazwą RS14203 po błędzie w identyfikacji związek (11, 26), a także następujące leki i badane związki: chlorowodorek erytro-9- (2-hydroksy-3-yfonylo) adeniny (EHNA; BIOMOL Research Laboratories Inc., Plymouth Meeting, Pennsylvania, USA), milrinone i dipyridamolu (Sigma-Aldrich Canada Ltd., Oakville, Ontario, Kanada), ksylazyny (Rompun, Bayer, Etobicoke, Ontario, Kanada), ketaminy (Ketaset, Ayerst, Montreal, Quebec, Kanada), polietylenu gl ycol (PEG; masa cząsteczkowa 200; Sigma, Milwaukee, Wisconsin, USA), winpocetyna i dipirydamol (Tocris Cookson Inc., Ballwin, Missouri, USA), pentobarbital sodu (Somnotol, MTC Pharmaceuticals, Cambridge, Ontario, Kanada) i MK-912 (zsyntetyzowane w Merck Research Laboratories , Rahway, New Jersey, USA). Tabela Wpływ strukturalnie zróżnicowanych inhibitorów PDE4 na ludzkie podtypy PDE4. Wyniki myszy C57BL / 6 Czas trwania znieczulenia. U myszy C57BL / 6 łączne podawanie ksylazyny (10 mg / kg) i ketaminy (80 mg / kg) wywoływało utratę odruchu postawy w ciągu 15 minut po wstrzyknięciu. Czas trwania znieczulenia wynosił około 50 minut. Różnicę w okresie znieczulenia można było zaobserwować, stosując inny szczep myszy (szczep 129SvJ: 35. 2 min; n = 8). U myszy C57BL / 6 czas znieczulenia wywołany kombinacją ksylazyna / ketamina był znacznie zmniejszony przez podanie MK-912, silnego antagonisty P2 o przenikalności mózgowej (27) (Figura 1). Figura Wpływ MK-912 na czas znieczulenia wywołany kombinacją ksylazyny (10 mg / kg) i ketaminy (80 mg / kg) u myszy C57BL / 6. Piętnaście minut po indukcji znieczulenia myszom wstrzyknięto wzrastające dawki MK-912 (n = 5 na dawkę) lub nośnik (PEG 60%, n = 34). Czas znieczulenia oceniano przez powrót odruchu prostującego. Wyniki wyrażono jako średnie. SEM. * Znacząco różni się od grupy nośników przy P <0,05. Inhibitory PDE. Role różnych PDE w hipnotycznym wpływie schematu anestezjologicznego pośredniczonego przez P2-adrenoceptor były badane przy użyciu selektywnych i mieszanych inhibitorów PDE. Winpocetyna (inhibitor PDE1), EHNA (inhibitor PDE2), milrinon (inhibitor PDE3) i dipirydamol (inhibitor PDE5 / 6/9/10/11) (28) nie miały istotnego wpływu na czas znieczulenia ksylazyną / ketaminą indukowaną badane dawki (3. 30 mg / kg, podskórnie) (Figura 2a). Przeciwnie, PMNPQ (inhibitor PDE4, 0,001 .l mg / kg, podskórnie) skracał czas znieczulenia w sposób zależny od dawki (Figura 2). PMNPQ był najsilniejszym inhibitorem PDE4 testowanym w tym modelu, a następnie w sile działania (R) -rolipram i (S) -rolipram (mniej aktywny enancjomer) (Figura 2b). CT-2450 nie miał wpływu na badane dawki (3. 30 mg / kg) po podaniu podskórnym (Figura 2b). Figura 2 Wpływ inhibitorów PDE na czas trwania znieczulenia indukowanego przez połączenie ksylazyny (10 mg / kg) i ketaminy (80 mg / kg) u myszy C57BL / 6 [przypisy: guz jelita grubego rokowania, gorące szesnastki, przychodnia pruszcz gdański ] [przypisy: pulneo na kaszel, metaloproteinazy, stomadent wrocław ]