Skip to content

Delecja fosfodiesterazy 4D u myszy skraca znieczulenie a-adrenoceptorowe, behawioralny korelator wymiotów czesc 4

3 tygodnie ago

92 words

Piętnaście minut po indukcji znieczulenia myszom wstrzyknięto rosnące dawki winpocetyny (inhibitor PDE1, n = 5 na dawkę), EHNA (inhibitor PDE2, n = 4 a 8 na dawkę), milrinon (inhibitor PDE3; = 2. 6 na dawkę), PMNPQ (inhibitor PDE4, n = 5 na dawkę), dipirydamol (inhibitor PDE5 / 6/9/10/11; n = 4. 5 na dawkę) lub nośnik (PEG 60%; n = 34); lub (b) zwiększenie dawek PMNPQ, (R) -rolipramu, (S) -rolipramu, CT-2450 (n = 5 na testowaną dawkę) lub nośnika (PEG 60%, n = 34). Czas znieczulenia oceniano przez powrót odruchu prostującego. Wyniki wyrażono jako średnie. SEM. * Znacząco różni się od grupy nośników przy P <0,05. Aby wykluczyć możliwość zmniejszenia wchłaniania lub dystrybucji do mózgu nieaktywnych testowanych inhibitorów PDE, próbki osocza i tkanki mózgowej zebrano pod koniec doświadczenia z leczonych zwierząt. Analiza tych próbek wykazała znaczące ilości inhibitorów PDE zarówno w osoczu, jak iw tkance mózgowej (tabela 2). Tabela 2 Stężenie Plazmy i mózgu inhibitorów PDE Pentobarbital sodu. Zdolność inhibitora PDE4 PMNPQ do skrócenia czasu znieczulenia zbadano w oparciu o schemat znieczulenia, w którym nie uczestniczyło adrenoreceptor (2-adrenoceptor (pentobarbital sodu, 50 mg / kg, dootrzewnowo) (29). W tych warunkach eksperymentalnych myszy C57BL / 6 traktowane podłożem spały przez średni okres 98. 5 minut (n = 4). Na czas trwania znieczulenia nie miały wpływu 3 mg / kg podskórnego MK-912 (96. 6 minut, n = 6) ani 0,1. mg / kg podskórnego PMNPQ (103. 2 minuty przy najwyższej dawce, n = 5). Charakterystyka fenotypów mysich i ekspresji białka PDE z deficytem PDE4D i niedoborem PDE4B. Hipnotyczne działanie agonistów P2-adrenergicznych odbywa się na poziomie pnia mózgu (30). Analiza Western blot wykazała, że immunoreaktywne PDE4D i PDE4B nie mogą być wykryte w pniach mózgu odpowiednio z niedoborem PDE4D i myszy pozbawionych PDE4B (Figura 3). Mierzono hydrolizę cAMP w ekstraktach z pnia mózgu z myszy pozbawionych PDE4D i PDE4B i ich odpowiedników z rodzaju dzikiego w obecności lub nieobecności 10. M rolipramu. Całkowita aktywność PDE była zmniejszona u myszy z niedoborem PDE4D w porównaniu z ich myszami z miotu typu dzikiego. Ta atenuowana aktywność PDE była wyłącznie spowodowana zmniejszeniem aktywności PDE wrażliwej na rolipram (aktywność PDE4) (Figura 4a). W przeciwieństwie do tego, u myszy z niedoborem PDE4B nie obserwowano znaczących zmian w całkowitej lub wrażliwej na rolipie aktywności PDE w porównaniu z myszami z ich rodzeństwa typu dzikiego (Figura 4b). Figura 3 Analiza Western blot z pnia mózgu myszy z niedoborem PDE4D i PDE4B i ich rodzeństwa z miotu typu dzikiego. Po lewej: Ekspresja białek PDE4D w pniu mózgu myszy z niedoborem PDE4D (A / P) i ich rodzeństwa z miotu dzikiego (+ / +). Mieszaninę rekombinowanego PDE4D3 i PDE4D5 (Rec) załadowano do kontroli. Po prawej: Ekspresja białek PDE4B w pniu mózgu myszy z niedoborem PDE4B (A / P) i ich rodzeństwa z miotu dzikiego (+ / +). Figura 4 Aktywność PDE w pniu mózgu u myszy z niedoborem PDE4D (a) i PDE4B (b) i ich rodzeństwa z miotu dzikiego. Aktywność PDE określono stosując 1. M cAMP jako substrat przy nieobecności (całkowitej aktywności) lub obecności (działanie niewrażliwe na rolipram) 10. M rolipramu. Aktywność wrażliwą na rolipram (aktywność PDE4) uzyskano przez odjęcie aktywności niewrażliwej na rolipram od całkowitej aktywności PDE. Wartości skorygowano względem ilości białka dodawanego do testu. Wyniki wyrażono jako średnie. SEM (n = 3. 9). * Znacząco inny przy P <0,05. Czas znieczulenia. Udział PDE4B i PDE4D w działaniu odwracającym anestezję inhibitorów PDE4 oceniano stosując myszy z niedoborem podtypu i ich miotów. Utrata prostowania odruchów obserwowano u wszystkich myszy w ciągu pierwszych 15 minut po podaniu kombinacji ksylazyny (10 mg / kg) / ketaminy (80 mg / kg), niezależnie od genotypu. W warunkach pojazdu znieczulenie trwało średnio 37. 6 minut (n = 7) u myszy typu dzikiego PDE4B i 32. 4 minuty w PDE4D typu dzikiego. Chociaż myszy z niedoborem PDE4B wykazywały czas znieczulenia podobny do ich rodzeństwa z miotu typu dzikiego i heterozygotycznego (Figura 5b), myszy z niedoborem PDE4D miały krótszy czas znieczulenia pod działaniem nośnika w porównaniu z ich rodzeństwem z miotu typu dzikiego (Figura 5a). ). Jednakże w znieczuleniu wywołanym pentobarbitalem sodu (50 mg / kg, dootrzewnowo), myszy z niedoborem PDE4D miały czas snu (71. 11 minut, n = 6) podobny do czasu ich heterozygoty (70. 13 minut; 6) lub rodzeństwa z miotu typu dzikiego (71. 16 minut; n = 6). Figura 5 Wpływ MK-912 i PMNPQ na czas znieczulenia wywołany kombinacją ksylazyny (10 mg / kg) i ketaminy (80 mg / kg) u myszy z niedoborem PDE4D (a) i myszy z niedoborem PDE4B (b) (. /.) i ich mioty z miotu (typu dzikiego, + / +, heterozygota, + /.) [przypisy: gorące szesnastki, ciasteczka z wróżbą teksty śmieszne, przychodnia pruszcz gdański ] [więcej w: gorące szesnastki, ksylazyna, epiduo żel cena ]