Skip to content

Potencjalne mechanizmy ekspansji ludzkich komórek NK w warunkach in vivo podczas leczenia niską dawką IL-2

1 tydzień ago

549 words

Ciągły wlew in vivo niskiej dawki IL-2 selektywnie rozszerza bezwzględną liczbę ludzkich komórek NK (NK) po 4. 6 tygodniach terapii. Mechanizm odpowiedzialny za to rozszerzenie jest nieznany i został zbadany w tym badaniu. Komórki NK hodowane przy niskich stężeniach IL-2, porównywalne z komórkami stwierdzonymi podczas terapii in vivo, proliferują przez 6 dni, a następnie opuszczają cykl komórkowy. Jednak komórki NK in vivo nie przechodziły fazy S / G2 / M cyklu komórkowego podczas terapii niską dawką IL-2. Niskie stężenia zaprogramowanej przez IL-2 opóźnionej śmierci komórkowej komórek NK, ale mają taki sam wpływ na spoczynkowe limfocyty T, które nie ulegają ekspansji in vivo. Gdy komórki krwiotwórcze szpiku kostnego CD34 + są hodowane przez 21 dni z niskim stężeniem IL-2, różnicują się do CD56 + CD3. Komórki NK, nie limfocyty T. Tak więc, selektywna ekspansja ludzkich komórek NK podczas ciągłego wlewu in vivo niskiej dawki IL-2 wynika prawdopodobnie ze zwiększonego różnicowania komórek NK od progenitorów szpiku kostnego, w połączeniu z zależnym od IL-2. opóźnieniem w śmierci komórek NK, raczej niż proliferacja dojrzałych komórek NK na obwodzie. Wstęp Komórki NK są dużymi ziarnistymi limfocytami, które wydzielają IFN-y i wykazują spontaniczną aktywność cytotoksyczną przeciwko komórkom złośliwym i zakażonym wirusem (1, 2). Wszystkie ludzkie komórki NK eksprymują antygen CD56, izoformę cząsteczki adhezyjnej komórki nerwowej. Około 10% komórek NK ma ekspresję CD56 (CD56bright) o dużej gęstości na ich powierzchni i konstytutywnie eksprymuje zarówno heterotrimeryczny receptor IL-2 o wysokim powinowactwie (IL-2R .), jak i heterodimeryczne IL-2R o pośrednim powinowactwie. . (3, 4). Dziewięćdziesiąt procent ludzkich komórek NK ma ekspresję CD56 o niskiej gęstości (CD56dim) i tylko eksprymuje heterodimeryczne IL-2R o pośrednim powinowactwie (2). W warunkach in vitro pikomolowe (pM) stężenia IL-2 wiążą się z IL-2R o wysokim powinowactwie ulegającym ekspresji na komórkach NK CD56bright, co powoduje silną odpowiedź proliferacyjną, której nie obserwuje się w komórkach NK CD56dim lub w spoczynkowych komórkach T w nieobecności inne sygnały mitogenne (3). Podawanie in vivo niskiej dawki IL-2 przez przedłużony ciągły wlew dożylny lub codzienne wstrzyknięcie podskórne prowadzi do stężeń pM IL-2, które selektywnie ekspandują komórki NK CD56bright przy niewielkiej zmianie liczby komórek NK CD56dim lub komórek T (5. 10). . Mechanizm, za pomocą którego ekspansja ta zachodzi in vivo, jest nieznany. Postawiliśmy hipotezę, że aktywacja komórek NK CD56bright poprzez IL-2R o wysokim powinowactwie. doprowadziły do proliferacyjnej ekspansji populacji in vivo, podobnej do obserwowanej w krótkoterminowej hodowli in vitro (3, 4). Jednak nasza wstępna analiza in vitro nie potwierdziła tej hipotezy (5). W bieżącym raporcie analizujemy proliferację ludzkich komórek NK CD56bright, apoptozę i różnicowanie in vitro i wykonujemy analizę cyklu komórkowego na ludzkich komórkach NK CD56bright poddawanych ekspansji podczas podawania małej dawki IL-2 in vivo. Wykazujemy, że selektywna ekspansja komórek NK podczas długotrwałej ekspozycji na niskie stężenia egzogennej IL-2 nie wydaje się być wynikiem dojrzałej proliferacji komórek NK in vivo. Przeciwnie, ekspansja in vivo najprawdopodobniej wynika z zależnego od IL-2 (3 zmniejszenia śmierci komórek NK i wzrostu różnicowania komórek NK z hematopoetycznych komórek progenitorowych (HPC). Metody Badanie kliniczne. U pacjentów zdiagnozowano ostrą białaczkę szpikową (AML) i uznano, że osiągnęli pełną remisję (tj. <5% blastów i prawidłową liczbę krwinek) po jednorodnej indukcyjnej i konsolidacyjnej chemioterapii (11). Następnie pacjenci otrzymywali przedłużony ciągły wlew leczenia niską dawką IL-2 (0,45 x 106 IU / m2 / d) przez 45 kolejnych dni. Następnie pacjenci otrzymywali ten sam codzienny wlew przez 11 dni, a następnie 24-godzinny wlew x 106 U / m2 / dzień w dniu 12, wlew 2 × 106 U / m2 / dzień w dniu 13 i wlew. 3 x 106 U / m2 / dzień w dniu 14. Ten cykl 14-dniowy był powtarzany przez dodatkowe 42 dni (6). Rekombinowana IL-2 (aktywność właściwa 1,8 x 107 IU / mg) została dostarczona przez Chiron Corp. (Emeryville, Kalifornia, USA). Czterech pacjentów z AML, którzy otrzymali identyczną terapię indukcyjną i konsolidacyjną, weszło całkowitej remisji, ale nie otrzymało terapii IL-2, zostało również przebadanych. Wszyscy pacjenci uczestniczący w badaniu podpisali świadomą zgodę zatwierdzoną przez Institutional Review Board w Roswell Park Cancer Institute. Odczynniki. Królicze anty-ludzkie IL-2 i kontrolne polisery zakupiono od PeproTech (Rocky Hill, New Jersey, USA). Mysie mAb anty-ludzkie CD25 i mAb kontrolne izotypu zakupiono od Biosource International (Camarillo, Kalifornia, USA). Sprzężone z PE przeciwciała anty-CD56 (NKH1-RD1) i anty-CD5 (T1-RD1) zakupiono od Coulter Immunology (Hialeah, Floryda, USA) [przypisy: wyszukiwarka sanatorium nfz, sanatorium goczałkowice zdrój, pytania do złotych myśli ] [więcej w: przychodnia łucznicza szczecin, podsłuchane w biedrze, zaburzenie częściowe ]