Skip to content

Selektywność kompetentnego pod względem replikacji adenowirusa dla ludzkich komórek raka sutka eksprymujących antygen MUC1 ad 5

5 dni ago

757 words

Ksenoprzeszczepy guza MCF-7 (150 mm3) wstrzyknięto 2 x 108 pfu Ad.DF3. – gal (górny panel) lub Ad.DF3-E1 / CMV-GFP (dolny panel). W 21 dni po iniekcji guzy usunięto, zatopiono w OCT (Tissue-Tek; Sakura Finetek USA Inc., Torrance, California, USA) i zamrożono na suchym lodzie. Następnie zostały one kriogenizowane za pomocą mikrotomu. Skrawki utrwalono w 0,5% aldehydem glutarowym i wybarwiono X-gal (górny panel, x 200). Sekcje pokazane w dolnym panelu były wizualizowane przez STORM (Molecular Dynamics, Sunnyvale, California, USA). Ekspresja TNF przez Ad.DF3-E1. Konstrukcja kompetentnego względem MUC1 wirusa Ad.DF3-E1 o zdolności do ekspresji dodatkowych transgenów pozwala na wstawienie różnych genów kodujących produkty terapeutyczne. TNF wybrano jako kandydata wstępnego ze względu na jego bezpośrednią aktywność przeciwnowotworową (18). Wirus Ad.DF3-E1 / CMV-TNF skonstruowano przez podstawienie GFP sekwencjami TNF (Figura 7a). Aby ocenić wpływ promotora CMV na transkrypcję kierowaną przez promotor DF3, porównaliśmy ekspresję E1A w komórkach MCF-7 z ekspresją MUC1 i ZR-75-1, które zostały zainfekowane Ad.DF3-E1 lub Ad.DF3-E1. / CMV-TNF. Wyniki pokazują, że promotor CMV ma niewielki, jeśli jakikolwiek wpływ na transkrypcję kierowany przez promotor DF3 (Figura 7b). Zakażenie komórek DF3-E1 / CMV-TNF komórek MCF-7, ale nie komórek PA-1, było również związane z efektami cytopatycznymi (dane nie pokazane). Ponadto, wzrost wirusa Ad.DF3-E1 / CMV-TNF w komórkach MUC1-dodatnich skutkował mianami, które były o 4. 5 log wyższe niż wirusy hodowane w komórkach MUC1-ujemnych. Te wyższe miano obsługuje replikację, podobnie jak w przypadku Ad.DF3-E1, w zależności od ekspresji MUC1 (dane nie pokazane). Zgodnie z tymi ustaleniami, zakażenie komórek MCF-7 Ad.DF3-E1 / CMV-TNF było związane z wytwarzaniem TNF, który był 106-krotnie wyższy niż uzyskany po zakażeniu Ad.CMV-TNF (Tabela 1). Ponadto wytwarzanie TNF przez komórki MCF-7 zakażone Ad.DF3-E1 / CMV-TNFa było również 105- do 106-krotnie wyższe niż to uzyskane przez podobne zakażenie komórek PA-1 (tabela 1). Wyniki te pokazują, że Ad.DF3-E1 / CMV-TNF jest selektywny dla komórek MUC1-dodatnich i że ekspresjonuje transgen TNF. Figura 7 Charakterystyka Ad.DF3-E1 / CMV-TNF. (a) Struktura Ad.DF3-E1 / CMV-TNF. (b) Komórki zakażono Ad.DF3-E1 lub Ad.DF3-E1 / CMV-TNF. Lizaty poddano analizie immunoblot z użyciem anty-E1A. Tabela Wytwarzanie TNF w komórkach MCF-7 i PA-1 Leczenie heteroprzeszczepów ludzkiego guza sutka za pomocą Ad.DF3-E1 / CMV-TNF. U myszy nagich stwierdzono MUC1-dodatnie MCF-7 i MUC1-ujemne guzy MDA-MB-231 w celu oceny leczenia Ad.DF3-E1 / CMV-TNF. Myszom noszącym nowotwory o wielkości 150-200 mm3 wstrzyknięto podskórnie 108 pfu wirusa w PBS. W porównaniu z iniekcjami samej PBS, leczenie guzów MDA-MB-231 Ad.DF3-E1 / CMV-TNF powodowało efekty hamujące wzrost (Figura 8a). Podobnie, leczenie komórek MCF-7 defektywnym wirusem Ad.CMV-TNF było związane z częściową supresją wzrostu (Figura 8b). Wyniki te wskazują, że ekspresja TNF w kontekście wirusa niekompletnego do replikacji jest niewystarczająca do wywołania regresji nowotworu. W przeciwieństwie do tych wyników, leczenie nowotworów MCF-7 Ad.DF3-E1 / CMV-TNF, ale nie Ad.DF3-E1 / CMV-GFP, było związane z regresją do ledwo wyczuwalnych guzów (Figura 8b). Cztery z pięciu zwierząt obserwowano przez dłuższe okresy; jedno zwierzę wykazywało odrastanie guza, a pozostałe trzy miały ledwo wyczuwalne nowotwory (Figura 8c). Ponowne leczenie nawrotowego guza za pomocą Ad.DF3-E1 / CMV-TNF w dniu 105 było związane z późniejszą regresją (Figura 8c). Odkrycia te wskazują, że aktywność przeciwnowotworowa jest wzmacniana w położeniu wirusa, który wykazuje selektywną kompetencję do replikacji i ekspresji transgenu TNF. Figura 8 Niezależne działanie Ad.DF3-E1 / CMV-TNF. Miano M-MB-231 i heteroprzeszczepy guza MCF-7 hodowano podskórnie u myszy nagich do objętości 150 – 200 mm3. (a) Grupom myszy (n = 5) z guzami MDA-MB-231 wstrzyknięto dnaczyniowo PBS (puste kwadraty) lub 108 pfu Ad.DF3-E1 / CMV-TNF (wypełnione romby) w dniu 0. (b) ) Grupy myszy (n = 5) z nowotworami MCF-7 wstrzyknięto podskórnie PBS (puste kwadraty), 108 pfu Ad.CMV-TNF (wypełnione kwadraty), 108 pfu Ad.DF3-E1 / CMV-TNF ( wypełnione romby) lub 108 pfu Ad.DF3-E1 / CMV-GFP (otwarte trójkąty) w dniu 0. (c) Myszy z guzami MCF-7, którym wstrzyknięto Ad.DF3-E1 / CMV-TNF, obserwowano przez więcej niż 56 dni. Jedna mysz zmarła w 52. dniu bez żadnych guzów. Spośród pozostałych czterech myszy, jedna wykazywała odrastanie guza (otwarte kółka). Mysz tę ponownie wstrzyknięto 108 pfu Ad.DF3-E1 / CMV-TNF w 105 dniu (strzałka)
[patrz też: joanna opozda wikipedia, guz jelita grubego rokowania, joanna opozda wikipedia przyczyny ]
[patrz też: ksylazyna, epiduo żel cena, joanna opozda wikipedia ]