Skip to content

Selektywność kompetentnego pod względem replikacji adenowirusa dla ludzkich komórek raka sutka eksprymujących antygen MUC1 czesc 4

2 tygodnie ago

461 words

Przeciwnie, w porównaniu z Ad5, miano Ad.DF3-E1 zostało zmniejszone o 5. 6 log w komórkach MDA-MB-231 i PA-1 pozbawionych MUC1 i przez 4. 5 log w komórkach Hs578Bst (Figura 3) . W celu określenia, czy Ad.DF3-E1 indukuje selektywną lizę komórek, zainfekowaliśmy komórki MCF-7, komórki PA-1 i komórki Hs578Bst w moi s0 wynoszące 0,01, 0,1 i 1,0. Tworzenie płytki nazębnej oceniano w dniach 3, 5 i 7. Chociaż komórki MCF-7 wykazywały lizę indukowaną Ad.DF3-E1 (Fig. 4a), nie było widocznych efektów cytopatycznych Ad.DF3-E1 na PA-1 ( Figura 4b) lub komórki Hs578Bst (Figura 4c). Wyniki te współdziałają z komórkową ekspresją E1A i demonstrują selektywną replikację Ad.DF3-E1 w komórkach raka piersi z dodatnim MUC1. Ryc. 3Replication efficiency of Ad.DF3-E1 (otwarte kółka), Ad.DF3-E1 / CMV (otwarte trójkąty), Ad.DF3-E1 / CMV-TNF (wypełnione romby) i Ad5 typu dzikiego (otwarte kwadraty) w ludzkie linie komórkowe. Monowarstwy w 24-studzienkowych płytkach zakażono w moi 1,0 pfu na komórkę. Wytwarzanie wirusa oceniano za pomocą testów łysinkowych. Ryc. 4 Efekty cytopatyczne związane z infekcją Ad.DF3-E1. Komórki MCF-7, PA-1 i Hs578Bst infekowano Ad.DF3-E1 lub Ad5 typu dzikiego we wskazanym moi. Fotomikrografię uzyskano we wskazanym czasie po zakażeniu. × 200. Leczenie heteroprzeszczepów nowotworu sutka za pomocą Ad.DF3-E1. W celu oceny skuteczności terapeutycznej Ad.DF3-E1 in vivo, heteroprzeszczepy guza sutka MCF-7 i MDA-MB-231 ustalono u nagich myszy, a następnie wstrzyknięto jednokrotnie 2 x 108 pfu Ad.DF3-E1. Jako kontrole do guzów wstrzyknięto albo PBS, albo defektywny pod względem replikacji wirus Ad.DF3y-gal. Zakażenie Ad.DF3-E1 było związane z hamowaniem wzrostu guza MCF-7 (Figura 5a). W 4 tygodnie po wstrzyknięciu Ad.DF3-E1 nowotwory ustąpiły i stały się ledwie wyczuwalne (ryc. 5a). Odkrycia te kontrastowały z progresywnym wzrostem guzów, którym wstrzyknięto PBS lub Ad.DF3. – gal (Figura 5a). Natomiast Ad.DF3-E1 nie miało widocznego wpływu na wzrost guzów MDA-MB-231 (Figura 5b). Wyniki te wskazują, że pojedyncze wstrzyknięcie Ad.DF3-E1 powoduje selektywną cytolizę i regresję guza MUC1-dodatniego. Figura 5 Wpływ Ad.DF3-E1 na wzrost heteroprzeszczepów nowotworowych MCF-7 i MDA-MB-231 u myszy nagich. MCF-7 (a) lub MDA-MB-231 (b) heteroprzeszczepy guza hodowano podskórnie do objętości 150. 200 mm3. Grupy myszy (n = 5) traktowano 2 x 108 pfu Ad.DF3-E1 (wypełnione romby) lub Ad.DF3 A – gal (wypełnione kwadraty) przez wstrzyknięcie do guza w dniu 0. Równą objętość PBS wstrzykiwany jako kontrola (otwarte kwadraty). Guzy mierzono co tydzień. Wyniki wyrażono jako ułamkową objętość guza (V / V0). Guzy MCF-7 zakażone Ad.DF3-E1 były znacząco mniejsze niż te leczone PBS lub Ad.DF3. Gal w dniu 21 (P <0,001), dzień 28 (P <0,001) i dzień 35 (P <0,05). 0,01). Dystrybucja Ad.DF3-E1 w guzach. Przeszkodą w stosowaniu terapii genowej w leczeniu raka jest trudność w rozprowadzaniu wektora w całej masie guza. Stwierdzenie, że Ad.DF3-E1 indukuje regresję nowotworu, wspiera rozprzestrzenianie się tego wirusa poza początkowe miejsce zakażenia. W celu oceny dystrybucji wirusa i wygenerowania kompetentnych wirusów Ad.DF3-E1, które mają zdolność włączania dodatkowych transgenów, promotor CMV wstawiono powyżej genu wyrażającego GFP (Figura 6a). Infekcja komórek MCF-7 Ad.DF3-E1 / CMV-GFP (moi = 10) była związana z małą ekspresją GFP po 36 godzinach (Figura 6b). Jednakże, przez 72 godziny po zakażeniu (okres wystarczający do replikacji wirusa), wyraźnie wykryto ekspresję GFP i indukcję efektów cytopatycznych (Figura 6b i dane nie pokazane). Podobna infekcja komórek PA-1 spowodowała znacznie mniejszą ekspresję GFP po 72 godzinach, bez śladów lizy (Figura 6b i dane nie pokazane). Wirus Ad.DF3-E1 / CMV-GFP wstrzyknięto również do heteroprzeszczepów guza MCF-7 w celu oceny dystrybucji wirusa. Jako kontrolę, guzowi wstrzyknięto wirusa Ad.DF3 A. Gal uszkodzonego pod względem replikacji. Barwienie guza pod kątem ekspresji p-gal wykazało infekcję Ad.DF3. Gal wyłącznie wzdłuż ścieżki igły (Figura 6c). Przeciwnie, ekspresja GFP była wykrywalna w całej masie guza (Figura 6c). Te wyniki pokazują, że kompetentny wirus Ad.DF3-E1, ale nie wirus defektywny pod względem replikacji, rozprzestrzenia się w całym guzie. Figura 6 Charakterystyka i dystrybucja do wnętrza guza Ad.DF3-E1 / CMV-GFP. (a) Struktura Ad.DF3-E1 / CMV-GFP. (b) Komórki MCF-7 i komórki PA-1 zakażono Ad.DF3-E1 / CMV-GFP w moi 10. Ekspresja GFP była oceniana przez badanie fotomikrograficzne po 36 godzinach i 72 godzinach po infekcji. [przypisy: azotyny w moczu przyczyny, kiedy szczepić na pneumokoki, ile kalorii spalamy podczas biegania ] [przypisy: ciastka z wróżbą teksty, czy da się cofnąć czas, gorące szesnastki ]