Skip to content

Selektywność kompetentnego pod względem replikacji adenowirusa dla ludzkich komórek raka sutka eksprymujących antygen MUC1

3 tygodnie ago

700 words

Gen DF3 / MUC1 ulega nadmiernej nadekspresji w ludzkiej piersi i innych nowotworach. Wcześniejsze badania wykazały, że promotor / wzmacniacz DF3 / MUC1 nadaje selektywną ekspresję różnych transgenów w komórkach raka sutka MUC1-dodatnich. W tym badaniu wykazano, że wektor adenowirusowy (Ad.DF3-E1), w którym promotor DF3 / MUC1 napędza ekspresję E1A selektywnie replikuje w komórkach raka sutka MUC1-dodatnich. Pokazujemy również, że infekcja Ad.DF3-E1 ludzkich heteroprzeszczepów nowotworów sutka u nagich myszy jest związana z hamowaniem wzrostu guza. W przeciwieństwie do niekompetentnego wektora adenowirusowego, który infekuje wzdłuż ścieżki iniekcji, infekcja Ad.DF3-E1 była wykrywalna w całym ksenoprzeszczepach nowotworowych. Aby wygenerować wektor Ad.DF3-E1 o zdolności do włączania produktów terapeutycznych, wstawiliśmy promotor cytomegalowirusa (CMV) powyżej cDNA TNF. Zakażenie Ad.DF3-E1 / CMV-TNF było związane z selektywną replikacją i wytwarzaniem TNF w komórkach, które eksprymują MUC1. Ponadto, leczenie MUC1-dodatniego, ale nie MUC1-ujemnego, ksenoprzeszczepów z pojedynczym wstrzyknięciem Ad.DF3-E1 / CMV-TNF było skuteczne w indukowaniu stabilnej regresji guza. Odkrycia te wykazują, że promotor DF3 / MUC1 nadaje kompetencję do selektywnej replikacji Ad.DF3-E1 w komórkach nowotworu sutka z dodatnim MUC1 i że aktywność przeciwnowotworowa tego wektora jest wzmacniana przez integrację cDNA TNF. Wprowadzenie Rekombinowane adenowirusy zastosowano jako wysoce wydajne wektory do transferu genów in vitro i in vivo. Transdukcja genowa za pośrednictwem adenowirusa została osiągnięta w szerokim spektrum komórek eukariotycznych i jest niezależna od replikacji komórek (1, 2). Ponadto, usunięty gen E1, adenowirusy defektywne pod względem replikacji mogą pomieścić duże inserty DNA (1,2). Jednak ograniczenia tego systemu wektorowego do leczenia raka obejmowały nieselektywne dostarczanie genów terapeutycznych zarówno do normalnych komórek, jak i do komórek nowotworowych. Co więcej, adenowirusy defektywne pod względem replikacji są ograniczone przez niezdolność do infekowania, a następnie rozprzestrzeniania się na sąsiednie komórki nowotworowe. Strategie obejścia tych ograniczeń obejmowały zastosowanie promotorów lub wzmacniaczy, które są specyficzne lub selektywne dla tkanki nowotworowej w celu bezpośredniej replikacji adenowirusa w pożądanych komórkach docelowych (3). W tym kontekście, minimalny promotor / wzmacniacz z genu antygenu specyficznego dla prostaty (PSA) został wykorzystany do kierowania ekspresją E1A i tym samym tworzenia adenowirusa, oznaczonego CN706, który selektywnie replikuje w komórkach PSA-dodatnich (4). Podobną strategię wykorzystującą promotor albuminy zastosowano do opracowania wirusa opryszczki pospolitej, który selektywnie replikuje się w komórkach wątrobiaka (5). Antygen DF3 / MUC1 jest glikoproteiną o dużej masie cząsteczkowej, która jest nieprawidłowo nadeksprymowana w ludzkiej piersi i innych nowotworach (6. 8). Gen MUC1 zawiera siedem eksonów i został zmapowany do chromosomu 1q21-24 (9, 10). Rozciąga się w granicach 4. 7 kb. S, w zależności od liczby zachowanych powtórzeń tandemowych 60 bp. Nadekspresja genu MUC1 w ludzkich komórkach raka sutka jest regulowana na poziomie transkrypcji (11, 12). Klonowanie i charakteryzowanie 5. region flankujący genu MUC1 wykazał, że ekspresja genu jest regulowana głównie przez sekwencje między pozycjami 598 bp i a 485 bp powyżej miejsca rozpoczęcia transkrypcji (13). Region promotora / wzmacniacza MUC1 został pokazany w kontekście retrowirusowych wektorów do kierowania ekspresją enzymów aktywujących proleki i do selektywnego zabijania komórek ludzkiego raka MUC1 (14). W innych badaniach z adenowirusami defektywnymi pod względem replikacji, promotor MUC1 został użyty do selektywnej ekspresji P-galaktozydazy (a-gal) lub kinazy tymidynowej wirusa opryszczki pospolitej (HSV-tk) w komórkach raka piersi z dodatnim MUC1 (15). W tym badaniu skonstruowaliśmy adenowirusa, w którym sekwencje E1A ulegają ekspresji pod kontrolą promotora MUC1. Wyniki pokazują, że wirus replikuje się selektywnie w komórkach MUC1-dodatnich in vitro. Wykazujemy również, że wirus jest skuteczny w ekspresji transgenu TNF i leczeniu heteroprzeszczepów MUC1-dodatniego raka piersi u nagich myszy. Metody Komórki i hodowla komórkowa. Następujące komórki otrzymano z American Type Culture Collection (Manassas, Virginia, USA): linie komórek ludzkiego raka sutka MCF-7, ZR-75-1, BT-20 i MDA-MB-231; linia komórkowa mioepitelialna Hs578Bst pochodząca z prawidłowej tkanki piersi sąsiadującej z naciekającym rakiem przewodowym; linia komórek ludzkiego raka jajnika PA-1; oraz linia ludzkich komórek embrionalnej nerki (HEK) 293. Komórki MCF-7, MDA-MB-231, Hs578Bst i HEK 293 hodowano w DMEM
[podobne: mleko kokosowe właściwości, ciasteczka z wróżbą teksty śmieszne, azotyny w moczu przyczyny ]
[więcej w: immunosan, ncm świętokrzyska, maxi3vena opinie ]