Skip to content

W nowatorskiej formie IFN-y niedobór receptora 1, receptory na powierzchni komórki nie wiążą IFN-y ad

2 miesiące ago

737 words

Pacjent I.1 był jedynym dzieckiem, które urodziło się w rodzinie kuzynów z Algierii mieszkającej we Francji. Została zaszczepiona w wieku roku, a infekcja BCG była skutecznie leczona lekami przeciwprątkowymi przez rok. Trzy miesiące po zaprzestaniu antybiotykoterapii zdiagnozowano rozsiane zakażenie Mycobacterium avium. Częściową remisję uzyskano dla antybiotyków. Dziecko przeszło przeszczepienie szpiku kostnego od wuja identycznego z HLA w wieku 3 lat i zmarło 2 miesiące później po rozproszonej reakcji ziarniniakowej po pełnym wszczepieniu. Pacjenci II.1 i II.2 rodzili się z pokrewnych tureckich rodziców mieszkających w Turcji. Dziewczynka (II.1) miała nawracające zakażenie BCG, które słabo reagowało na leczenie antybiotykami. W wieku 10 lat zdiagnozowano rozsianego Mycobacterium fortuitum. Ma ona 11 lat i jest bardzo chora pomimo leczenia antybiotykami. Chłopiec (II.2) miał nawracające infekcje BCG do 8 roku życia, gdy rozpoznano również rozsiane zakażenie Mycobacterium fortuitum. Ma teraz 9 lat i jest w częściowej remisji z wieloma antybiotykami. Dwoje rodzeństwa zmarło w wieku 3 lat z powodu ostrej białaczki i duru brzusznego. Trzech innych, obecnie w wieku 18, 21 i 25 lat, zostało zaszczepionych BCG bez żadnych skutków ubocznych i jest zdrowe. Pacjent III.1 był drugim dzieckiem urodzonym przez francuską matkę i portugalskim ojcem mieszkającym we Francji. Rozsiane infekcje BCG zostały zdiagnozowane we wczesnym stadium i dobrze zareagowały na leki przeciwprątkowe, które były kontynuowane. Ma teraz 2 lata i obecnie przechodzi od matki transplantację szpiku kostnego HLA. Jej starszy brat został zaszczepiony BCG bez żadnych działań niepożądanych i ma się dobrze w wieku 5 lat. Genetyka molekularna. Genomowy DNA ekstrahowano z komórek krwi i transformowanych EBV limfocytów B (EBV-B), a egzonony IFNGR1 i flankujące regiony intronowe amplifikowano jak opisano w innym miejscu (11, 17). Egzony 2, 3 i 5 zamplifikowano stosując następujące startery: ekson 2, sens 5 (3 -ATC TTA CAA TAA ggC TTT CC-3. i antysensowny 5 (3 -AAg gAC CTA AAC AAA AAT gg-3a; ekson 3: sens. 5 (3 -CTg TgA ATA AAA AgC AAA gC-3. i antysensowny 5a-AAA gCA AAC ATA CAg AAg AC-3a; ekson 5, sens 5 a-TgA CCA ggA CTA ATA Tgg Tg-3. i antysensowny 5 (3 -ACT gCT CCC TCT ATA TTT Ag-3 .. Warunki cykli PCR były następujące: 5 minut w 94 ° C, a następnie 35 cykli amplifikacji (1 minuta w 94 ° C, minuta w 50. 56 ° C, minuta w 72 ° C) i 10 minut w 72 ° C. Ekstrakcję RNA, syntezę cDNA i cDNA-PCR IFNGR1 przeprowadzono w sposób opisany uprzednio (17). Produkty PCR były sekwencyjnie sekwencjonowane, jak opisano wcześniej (17). Wykrywanie IFNy-R1 z przeciwciałami i IFN-y. PBMC wyizolowano jak opisano wcześniej (13). Komórki PBMC lub EBV-B barwiono specyficznymi mysimi mAb dla ludzkiego IFNy1R1 lub ich izotypowych przeciwciał kontrolnych. Następnie inkubowano je z biotynylowanym szczurzym przeciwciałem przeciw mysim (Immunotech, Marsylia, Francja) i streptawidyną-fikoerytryną (Tebu, Le Perray i Yvelines, Francja). Przeciwciało GIR94 to IgG2b (Genzyme Pharmaceuticals, Cambridge, Massachusetts, USA) (18), a inne swoiste przeciwciała to IgG1 i obejmują 21 / 31.1 (Valbiotech, Paryż, Francja), GIR208 (Genzyme) (18), AR38 i A R99 ( 19), A6 (20), 177,1 (21) i IR2 (22). Wszystkie przeciwciała były niezależne i wszystkie oprócz jednego (GIR94) blokowały przeciwciała. Komórki EVB-B i bramkowane monocyty analizowano na cytometrze przepływowym FACScan przy użyciu oprogramowania Lysis-II lub Cellquest (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose, California, USA). Specyficzne wiązanie nieglikozylowanego 125I (3 IFN-a do powierzchni komórek EBV-B Cząsteczki IFNy1R1 określono ilościowo po godzinie inkubacji w 4 ° C, jak opisano poprzednio (17, 23). Wczesna i późna odpowiedź komórkowa na IFN-y. Komórki EBV-B hodowano, aktywowano przez inkubację przez 30 minut z różnymi stężeniami rekombinowanego nieglikozylowanego ludzkiego IFN-y. (BioGenex Laboratories, San Ramon, Kalifornia, USA) i poddano lizie na lodzie, jak opisano wcześniej (13, 24). Test przesunięcia ruchliwości przeprowadzono z użyciem ekstraktów jądrowych (10. G białka) i znakowanej 32P. S dwuniciowej sondy DNA odpowiadającej IFN-y. region odpowiedzi (sekwencja aktywująca gamma [GAS]). Transformowane SV-40 p fibroblasty hodowano i stymulowano IFN-y. przez 48 godzin, jak podano wcześniej (11). Cząsteczki HLA-DR na powierzchni komórki wykryto za pomocą cytometrii przepływowej przy użyciu specyficznych przeciwciał, jak opisano wcześniej (11). Wyniki Badaliśmy czworo dzieci z niewyjaśnioną infekcją mykobakteryjną. Dwa przypadki były sporadyczne (I.1 i III.1), a dwie były rodzinne (II.1 i II.2, rodzeństwo). Trzy rodziny nie były ze sobą powiązane (ja, Algieria, II, Turcja, III, Francja / Portugalia)
[patrz też: karma dla owczarka niemieckiego, boję się jeździć samochodem, wyszukiwarka sanatorium nfz ]
[więcej w: ncm świętokrzyska, maxi3vena opinie, boję się jeździć samochodem ]